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STEMCELL Technologies Inc.
入驻年限：7 年
- 联系人：
STEMCELL Technologies
- 所在地区：
上海
- 业务范围：
试剂、实验室仪器 / 设备、技术服务、耗材、细胞库 / 细胞培养、抗体、ELISA 试剂盒
- 经营模式：
生产厂商
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公司新闻/正文
导师不教！仅需 4 步，15 分钟就能分离出高纯度 PBMCs
1533 人阅读发布时间：2024-05-28 14:21
外周血单个核细胞 (PBMC) 的传统分离通常费时费力，其首先需要使用密度梯度离心液使血液缓慢分层，然后在关闭刹车的情况下进行30分钟的长时间离心，并使用移液管小心地收集 PBMC。一般来说，整个过程大概需要60分钟左右，并且加样过程需要格外小心以避免样本与密度梯度离心液混合。
STEMCELL的 SepMate™ 密度梯度离心管 可以在短短 15 分钟内快速、高效地从全血中分离 PBMCs。SepMate™ 离心管包含一个特殊插件，将血液与离心液分隔开，离心后具有明显的分层，只需要简单倾倒便能收集到高质量的 PBMC。
所需耗材及试剂
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全血样本
-
密度为1.077 g/mL的密度梯度离心液（如Lymphoprep™，产品号 #07801）
-
含2%胎牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS + 2% FBS，产品号 #07905）或其他合适的培养基
-
SepMate™离心管
图1 SepMate™分离单个核细胞的流程图
实验方案
第一部分：样品准备
使用适当的抗凝剂（例如酸性柠檬酸葡萄糖[ACD]或肝素）收集全血。在使用 SepMate™ 之前，全血样本可在室温 (15 - 25°C) 下保存不超过 48 小时。使用适当的抗凝剂（例如ACD或肝素）收集骨髓。在使用SepMate™之前，骨髓样本在室温下保存的时间不得超过48小时。
第二部分：使用 SepMate™ 分离PBMCs
确保样品、推荐培养基（PBS + 2% FBS）、密度梯度离心液和离心机均处于室温（15 - 25°C）。
1. 小心地使用移液器将密度梯度离心液加入到SepMate™插件的孔中。密度梯度离心液会没过插件上方。所需体积请参阅表 1。
| SepMate™管 | 初始样品体积（mL） | 密度梯度离心液体积（mL） |
| SepMate™-15 | 0.5 - 4 | 4.5 |
| SepMate™-15 | 4 - 5 | 3.5 |
| SepMate™-50 | 4 - 17 | 15.0 |
2. 用等体积的PBS + 2% FBS溶液稀释样品（例如，用5 mL PBS + 2% FBS溶液稀释5 mL样品），并轻轻混合。
3. 保持SepMate™管垂直，沿着管壁将稀释的样品加到管中。样品将与插件上方的密度梯度离心液混合。
4. 在室温下以1200 x g 离心10分钟（打开离心机刹车）。对于超过 24 小时的样品，建议离心时间为20分钟。
5. 将含富集有MNCs的上层溶液倒入新管中。请勿将SepMate™管倒置超过2秒。
6. 用PBS + 2% FBS溶液清洗富集的MNCs，并重复清洗。建议在室温下以300 x g离心8分钟，并打开刹车。
7. 若要从富集的MNCs中去除血小板，请在室温下以120 x g进行一次10分钟的清洗，并关闭刹车。
