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新品上市!eTeSR™ 提高您的 hPSC 单细胞传代标准

人阅读 发布时间:2023-12-11 10:26

新品上市!
eTeSR™,一款用于人多能干细胞 (hPSC) 单细胞维持培养和扩增的培养基。

在 STEMCELL Technologies,我们的科学家长期以来一直建议将 hPSC 作为聚集体进行常规传代,因为这种方法可以长期扩增多种不同的细胞系,同时保持高细胞质量和预期的核型。

随着越来越多的研究人员将单细胞传代用于 hPSC 的日常维持培养,他们发现这种单细胞传代的方案简化了实验流程,且兼容下游多种应用。尽管具有这些优势,但长期单细胞传代可能会引起 hPSC 培养物遗传不稳定等风险,并且一般的实验室少有严格的质量控制措施来评估这些 hPSC 的质量

为了满足这一需求,我们开发了 eTeSR™ 培养基,这是一种经过优化的新型 hPSC 维持培养基,减少与长期单细胞传代相关的细胞应激可用于常规 hPSC 维持培养或特定应用的单细胞培养方案

eTeSR™ 培养基的优势:
● 支持细胞保持高质量状态,同时通过增强的缓冲体系、关键成分(包括 FGF2)的稳定性和优化的代谢物允许灵活换液
● 增加细胞得率,同时减少日常维持培养期间与单细胞传代或细胞高密度相关的压力
● 使用兼容的基因编辑、克隆、分化和冻存方案完成您的工作流程
● 消除细胞自发性分化

 
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eTeSR™ 与每日换液及间隔换液(restricted feeding)的培养方案兼容,同时能保持高细胞质量和同等表现性能,此外还可与各种细胞培养基质一起使用,包括 Corning® Matrigel®hESC-Qualified Matrix和CellAdhere™ Laminin-521(产品号 #77003)。

更高的扩增效率
四个 hPSC 细胞系使用 TrypLE™ 进行单细胞传代,并在 Corning® Matrigel® 包被板上使用 mTeSR™1、mTeSR™ Plus 或 eTeSR™ 维持培养。
图 1 单细胞培养的 hPSC 在 eTeSR™ 中表现出更好的细胞扩增状态

细胞维持培养 11 代,使用 mTeSR™1 需每日换液,而使用 mTeSR™ Plus 和 eTeSR™ 则采用在第 4 天和随后第 5 天的间隔换液培养方案。通过将每次传代结束时的细胞数除以传代时接种的细胞数来计算累积的细胞数。结果显示,在 eTeSR™ 中进行单细胞培养的 hPSC 拥有更高的细胞扩增效率

细胞贴壁效率高
细胞接种后 24 小时,使用 Hoechst 对来自 STiPS-R038 的 hPSC 细胞系染色。将细胞以 4.7 x 104 个细胞/cm2 的密度分别接种到 Matrigel® 包被的 96 孔板中,并分别加入含 10μM Y-27632 的 mTeSR™1、mTeSR™ Plus 或 eTeSR™ 培养基。将培养板固定后,用 Hoechst 33342 染色,并使用 ImageXpress® Micro 4 显微镜成像。
 
图 2 hPSC 细胞系显微成像

比较培养在上述 3 种培养基中的细胞贴壁效率,发现 eTeSR™提高 hPSCs 以单细胞接种时的贴壁效率

更高的遗传稳定性
eTeSR™ 的配方中加入了包括 FGF2 在内的关键稳定成分,提高缓冲能力并优化代谢物,从而得到与其他 hPSC 维持培养基相比具有更高遗传稳定性的高质量 hPSCs。

图 3 eTeSR™ 能够改善 hPSC 单细胞传代并长期维持培养的遗传稳定性

当在 eTeSR™ 中培养时,与主要针对聚集体传代优化的培养基相比,单独克隆的 H1 和 H9 hPSC 中检测到的遗传变异数量显着减少(由 hPSC 遗传分析试剂盒检测),并通过 FISH 实验进行了证实。每个方框/正方形代表培养 20 周(30 代)的单个克隆。

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